要跑瓊脂糖凝膠電泳， 5ng 就能很清楚的跑出來(lái)是這樣嗎？能夠照相的清楚的條帶，至少需要多少量呢？
參考見(jiàn)解：5ng 已經(jīng)可以了，但是或許20ng50ng-200ng效果好，在此范圍內(nèi)呈線性。
把210bp的pcr產(chǎn)物進(jìn)行酶切,得到190+20bp的兩個(gè)片段,請(qǐng)問(wèn)能用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果嗎?用多大濃度的膠和多大的電壓呢?
參考見(jiàn)解：可以用瓊脂糖凝膠電泳分開,電壓不變,可用1.5%到2%的膠,20bp得片斷不一定能看得到,所以應(yīng)用未酶切的PCR片斷作對(duì)照.
瓊脂糖濃度（W/V）
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大小范圍（bp）
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0.6%
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1000-23000
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0.8%
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800-10000
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1.0%
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400-8000
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1.2%
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300-7000
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1.5%
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200-4000
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2%
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100-3000
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丙烯酰胺凝膠電泳更適合于分離純化小分子量核酸（5-500bp）并且分辨率高，可以達(dá)到1個(gè)bp。所以建議進(jìn)行丙烯酰胺凝膠電泳試試。
Marker做瓊脂糖凝膠電泳，發(fā)現(xiàn)Marker在加樣孔有一個(gè)明顯的亮帶，什么原因？
參考見(jiàn)解：marker有時(shí)會(huì)出現(xiàn)這樣的問(wèn)題,應(yīng)該是時(shí)間久了。新買時(shí)跑膠在點(diǎn)樣孔沒(méi)有,過(guò)一段時(shí)間就會(huì)在點(diǎn)樣孔出現(xiàn)亮點(diǎn)。也可能是蛋白，有時(shí)DNA提的不純含有蛋白時(shí)就會(huì)出現(xiàn)上樣孔有條帶的現(xiàn)象。
瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA時(shí),跑出的帶后面出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,什么原因造成的?
參考見(jiàn)解： DNA帶模糊??：
1、 DNA降解??避免核酸酶污染。
2、 DNA上樣量過(guò)多??減少凝膠中DNA上樣量。
3、 所用電泳條件不合適??電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)20V/cm，溫度＜30℃,巨大DNA鏈，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。
4、 DNA樣含鹽過(guò)高??電泳前通過(guò)乙醇沉淀去除過(guò)多的鹽。
5、 有蛋白污染??電泳前酚抽提去除蛋白。
6、 DNA變性，?電泳前勿加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA。
將從組織提取的DNA進(jìn)瓊行脂糖凝膠電泳，用的1.5%的膠加了EB，80V跑1小時(shí)，溴酚藍(lán)已經(jīng)跑到頭了，在紫外燈觀察什么帶也沒(méi)有，只見(jiàn)孔里面有橘紅色的亮光。好象沒(méi)跑出來(lái)，是怎么回事？
參考見(jiàn)解：
1、 根據(jù)目的條帶長(zhǎng)度來(lái)調(diào)整凝膠濃度，一般1.5％左右，也不一定。
2、 紫外燈下沒(méi)見(jiàn)帶，不一定沒(méi)有出孔，而是量少看不到，可以測(cè)一下濃度看一下，或直接試跑一下PCR。
3、 加一個(gè)marker孔，尤其你*次跑膠時(shí)。
4、 電泳時(shí)間可能過(guò)長(zhǎng)，一般75v×30min左右，但是具體看溴酚藍(lán)的離孔距離和目的條帶離孔距離。
